Pax et Mitf dans la signalisation, le développement des yeux et les mélanomes

Simon Saule

Simon Saule Chef d'équipe Tél :

Nous étudions le contrôle génétique de la différenciation neuronale et pigmentaire dans l’oeil. Ce travail a deux applications majeures : l’une concerne les mécanismes du développement et de la fonction des yeux, l’autre concerne l’étude e tumeurs oculaires, le rétinoblastome et le mélanome uval.

Mitf (pour microphthalmia transcription factor) est un facteur de transcription apparenté à Myc (facteurs bHLHZip) est exprimé dans les mélanocytes et est essentiel pour la prolifération et la différenciation de ces cellules. La localisation subcellulaire de ce facteur dépend de l’isoforme considérée, car plusieurs promoteurs sont utilisés pour produire ce facteur, et la localisation de la protéine dans la cellule peut être importante dans sa fonction. Nous avons préparés différents vecteurs codant les différentes isoformes de Mitf (distinctes par leur extrémité aminoterminale) fusionnées à la GFP afin d’étudier la cinétique de transport de Mitf entre le noyau et le cytoplasme. Les expériences de FRAP réalisées sur ces protéines (Fig.1) permettent de mesurer le retour de fluorescence dans la zone photoblanchie et d’avoir ainsi accès à la dynamique du transport nucleocytoplasmique de ces isoformes dans la cellule.

Figure 1 : expérience de FRAP réalisée sur des cellules BHK21 transfectées avec un vecteur codant l’isoforme MitfA-GFP. P-GFPNF : quantité de protéine MitfA-GFP libre dans le noyau au temps t; P-GFPNB, quantité de protéine MitfA-GFP liée dans le noyau au temps t; P-GFPc: quantité de protéine MitfA-GFP le cytoplasme au temps t. Kimp, constant d’import nucléaire; Kexp, constant d’export nucléaire; Kon, constante de liaison à la chromatine; Koff, constant de dissociation de ces structures nucléaires.
Figure 1 : expérience de FRAP réalisée sur des cellules BHK21 transfectées avec un vecteur codant l’isoforme MitfA-GFP. P-GFPNF : quantité de protéine MitfA-GFP libre dans le noyau au temps t; P-GFPNB, quantité de protéine MitfA-GFP liée dans le noyau au temps t; P-GFPc: quantité de protéine MitfA-GFP le cytoplasme au temps t. Kimp, constant d’import nucléaire; Kexp, constant d’export nucléaire; Kon, constante de liaison à la chromatine; Koff, constant de dissociation de ces structures nucléaires.

 

Le mélanome Uvéal (UM) est la tumeur oculaire la plus fréquente et la plus agressive de l‘adulte. C’est une tumeur rare avec 6 cas par million et par ans. La signature d’expression génique identifie deux classes, avec la classe 1 de bon pronostic et la classe 2 avec un fort risqué de métastases essentiellement localisées au foie. Ces études ont conduit à l’identification de gènes dont l’expression corrèle avec le développement métastatique.

Mon équipe étudie comment les protéines réglant la dynamique cytosquelette, les protéases et les enzymes de la réparation de l’AND agissent pour faciliter la migration et l’invasion cellulaire.

Notre objectif général est de disséquer les mécanismes moléculaires conduisant au développement des métastases de mélanome uvéal. Nous avons identifié la phosphatase PTP4A3 comme capable de prédire leur développement. Il est donc essential de maintenant identifier les cibles de cette phosphatase.

Notre plan de travail est d’analyser l’effet de PTP4A3 sur la phosphorylation des protéines et de décrire les voies biochimiques dans lesquelles sont impliquées les cibles de cette phosphatase afin de comprendre leur action sur la migration et l’invasion cellulaire.

Plus spécifiquement, nous utilisons des outils combinant biologie cellulaire, biologie moléculaire, biologie du développement. Nous étudions de quelle façon la sur- expression ou l’extinction de l’expression de ces gènes d’intérêt affecte la migration cellulaire in vitro par video-cinematographie, et invasion cellulaire in vivo en utilisant un modèle d’invasion dans l’oeuf de poule embryonné, après dépôt des cellules sur la membrane chorioallentoïde.

Publications clés

Année de publication : 2017

Malika Foy, Océane Anézo, Simon Saule, Nathalie Planque (2017 Mar 13)

PRL-3/PTP4A3 phosphatase regulates integrin β1 in adhesion structures during migration of human ocular melanoma cells.

Experimental cell research : DOI : S0014-4827(17)30117-9

Année de publication : 2015

Ewa Kotula, Nathalie Berthault, Celine Agrario, Marie-Christine Lienafa, Anthony Simon, Florent Dingli, Damarys Loew, Vonick Sibut, Simon Saule, Marie Dutreix (2015 May 29)

DNA-PKcs plays role in cancer metastasis through regulation of secreted proteins involved in migration and invasion.

Cell cycle (Georgetown, Tex.) : 1961-72 : DOI : 10.1080/15384101.2015.1026522

Année de publication : 2013

Selma Maacha, Nathalie Planque, Cécile Laurent, Caterina Pegoraro, Océane Anezo, Frédérique Maczkowiak, Anne H Monsoro-Burq, Simon Saule (2013 Dec 23)

Protein tyrosine phosphatase 4A3 (PTP4A3) is required for Xenopus laevis cranial neural crest migration in vivo.

PloS one : e84717 : DOI : 10.1371/journal.pone.0084717

Année de publication : 2011

Jérôme Couturier, Simon Saule (2011 Oct 21)

Genetic determinants of uveal melanoma.

Developments in ophthalmology : 150-65 : DOI : 10.1159/000328270
Corine Bertolotto, Fabienne Lesueur, Sandy Giuliano, Thomas Strub, Mahaut de Lichy, Karine Bille, Philippe Dessen, Benoit d'Hayer, Hamida Mohamdi, Audrey Remenieras, Eve Maubec, Arnaud de la Fouchardière, Vincent Molinié, Pierre Vabres, Stéphane Dalle, Nicolas Poulalhon, Tanguy Martin-Denavit, Luc Thomas, Pascale Andry-Benzaquen, Nicolas Dupin, Françoise Boitier, Annick Rossi, Jean-Luc Perrot, Bruno Labeille, Caroline Robert, Bernard Escudier, Olivier Caron, Laurence Brugières, Simon Saule, Betty Gardie, Sophie Gad, Stéphane Richard, Jérôme Couturier, Bin Tean Teh, Paola Ghiorzo, Lorenza Pastorino, Susana Puig, Celia Badenas, Hakan Olsson, Christian Ingvar, Etienne Rouleau, Rosette Lidereau, Philippe Bahadoran, Philippe Vielh, Eve Corda, Hélène Blanché, Diana Zelenika, Pilar Galan, , François Aubin, Bertrand Bachollet, Céline Becuwe, Pascaline Berthet, Yves Jean Bignon, Valérie Bonadona, Jean-Louis Bonafe, Marie-Noëlle Bonnet-Dupeyron, Fréderic Cambazard, Jacqueline Chevrant-Breton, Isabelle Coupier, Sophie Dalac, Liliane Demange, Michel d'Incan, Catherine Dugast, Laurence Faivre, Lynda Vincent-Fétita, Marion Gauthier-Villars, Brigitte Gilbert, Florent Grange, Jean-Jacques Grob, Philippe Humbert, Nicolas Janin, Pascal Joly, Delphine Kerob, Christine Lasset, Dominique Leroux, Julien Levang, Jean-Marc Limacher, Cristina Livideanu, Michel Longy, Alain Lortholary, Dominique Stoppa-Lyonnet, Sandrine Mansard, Ludovic Mansuy, Karine Marrou, Christine Matéus, Christine Maugard, Nicolas Meyer, Catherine Nogues, Pierre Souteyrand, Laurence Venat-Bouvet, Hélène Zattara, Valérie Chaudru, Gilbert M Lenoir, Mark Lathrop, Irwin Davidson, Marie-Françoise Avril, Florence Demenais, Robert Ballotti, Brigitte Bressac-de Paillerets (2011 Feb 1)

A SUMOylation-defective MITF germline mutation predisposes to melanoma and renal carcinoma.

Nature : 94-8 : DOI : 10.1038/nature10539

Année de publication : 2010

Cécile Laurent, Fabien Valet, Nathalie Planque, Licia Silveri, Selma Maacha, Océane Anezo, Philippe Hupe, Corine Plancher, Cécile Reyes, Benoit Albaud, Audrey Rapinat, David Gentien, Jérôme Couturier, Xavier Sastre-Garau, Laurence Desjardins, Jean-Paul Thiery, Sergio Roman-Roman, Bernard Asselain, Emmanuel Barillot, Sophie Piperno-Neumann, Simon Saule (2010 Dec 6)

High PTP4A3 phosphatase expression correlates with metastatic risk in uveal melanoma patients.

Cancer research : 666-74 : DOI : 10.1158/0008-5472.CAN-10-0605
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