Plateforme de protéines recombinantes

Activité

Les protéines sont des éléments essentiels à la vie de la cellule. Les protéines recombinantes sont produites au laboratoire par une bactérie ou  par des cellules eucaryotes (Levure, cellules d’insectes ou mammifères), dont le matériel génétique a été modifié. Elles peuvent être ensuite purifiées et utilisées en recherche pour comprendre les mécanismes complexes des fonctions cellulaires ou en thérapies.

La plateforme technologique de production de protéines recombinants a été créée en 1997. Elle a pour mission d’accompagner les différentes équipes de recherche de l’Institut Curie dans le développement de projets de production de protéines recombinantes et d’anticorps. Elle est également ouverte aux collaborations avec différents laboratoires académiques.
La plateforme a développé plusieurs systèmes d’expression de protéines recombinantes en utilisant différents types de cellules : Bactérie E.coli, levures, cellules de mammifères et cellules d’insectes/baculovirus. Toute protéine peut présenter des difficultés particulières en terme de quantité obtenue, de stabilité ou de solubilité, qui peuvent être des éléments essentiels à l’activité de cette protéine. Le savoir faire acquis depuis plusieurs années a permis de mener à bien plus d’une centaine de projets de production de différentes protéines (protéines sécrétées, nucléaires, membranaires.)
Aussi l’optimisation des séquences de gènes à produire est une étape essentielle dans la réussite du projet. Pour cela nous avons développé plusieurs combinaisons de vecteurs d’expression. Ces outils de génétiques associés à l’optimisation des conditions de culture cellulaire nous ont permis de faire aboutir plusieurs projets de production.
L’ensemble des systèmes d’expression optimisés (vecteurs, cellules) sont mis à disposition des équipes de recherche et des laboratoires académiques.
Les personnes utilisant nos outils pour leurs expériences s’engagent à citer la plateforme de l’Institut Curie dans les remerciements de leur publication.

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Objectifs

La plateforme a pour objectif le développement la mise à disposition des outils (souches, lignées cellulaire, vecteurs d’expression et des protocoles optimisés) nécessaires à l’expression de protéines recombinantes dans différentes système d’expression et la purification des protéines d’intérêt.

Module Protéine Recombinantes 

Les systèmes d’expression (vecteur et souche) disponibles à la plateforme :

Prokaryotic expression systems
Escherichia coli
 (diverses souches)
Bacillus megaterium

Yeast
Pichia pastoris (diverses souches)
Kluyveromyces lactis

Insect cells/Baculovirus
Sf9, Sf21, Hi5
Cellules S2 de drosophile

Protozoan
Leishmania tarentolae expression system

Mammalian cells :
– CHO-S, HEK293, NSO, HKB-11
Lignées de ciblage d’expression stable par FRT (CHO et HEK)

La production dans d’autres systèmes d’expression est possible dans certains cas particuliers.

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Module : Production et purification d’Anticorps

Anticorps polyclonaux
Anticorps monoclonaux

On assure la formation et la fourniture des protocoles et le mini réacteur cell-line  pour la production et purification des anticorps monoclonaux spécifique et polycloanux.

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Module Purification de protéines

2 système de purification Akta-pure (des grands volume) dont en libre service
On assure la formation de personnel ayant un grand programme de purification
Mise à la disposition les systèmes de purification et les colonnes
Entretien des appareils
Assure la purification pour des projet spécifiques (courte duré : interaction protéine-protéine  par exemple)

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Autres services :

Gestion de ressources technologiques

  • Développement de catalogue de protéines et d’enzymes recombinants
  • Préparation est distributions des vecteurs d’expression de protéines recombinantes
  • Développement de nouveaux vecteurs d’expression avec veille technologique
  • Maintien des stocks de baculovirus recombinant
  • Développement des procédés de purification de protéines

Réseaux et collaborations

La plateforme fait partie du réseau européen P4EU: (Protein Production and Purification Partnership in Europe).

Collaboration  étroite avec  les plateformes de production de protéines recombinantes de l’Institut Pasteur.

L’accès aux services de la plateforme :

Les services de la plateforme sont accessibles à toutes les équipes de l’Institut Curie.

La plateforme est ouverte aux laboratoires extérieurs à l’Institut Curie, une tarification différentielle est appliquée

Equipements

Fermenter for cell culture and protein production
Chromatography system: for protein purification
Cell Disruption: proteins extraction
Insect cell culture for protein production
Hybridoma system production
Akta flux for sample concentration

Formation

Le personnel de la plateforme est en charge des expériences liées aux projets menés sur la plateforme. Cependant, la formation sur la technologie de protéines recombinante est possible sur demande.

 

Publications clés

Année de publication : 2016

Catharina von Nicolai, Åsa Ehlén, Charlotte Martin, Xiaodong Zhang, Aura Carreira (2016 Sep 15)

A second DNA binding site in human BRCA2 promotes homologous recombination.

Nature communications : 12813 : DOI : 10.1038/ncomms12813

Année de publication : 2015

Serena Sanulli, Neil Justin, Aurélie Teissandier, Katia Ancelin, Manuela Portoso, Matthieu Caron, Audrey Michaud, Berangère Lombard, Simao T da Rocha, John Offer, Damarys Loew, Nicolas Servant, Michel Wassef, Fabienne Burlina, Steve J Gamblin, Edith Heard, Raphaël Margueron (2015 Mar 5)

Jarid2 Methylation via the PRC2 Complex Regulates H3K27me3 Deposition during Cell Differentiation.

Molecular cell : 769-83 : DOI : 10.1016/j.molcel.2014.12.020

Année de publication : 2014

Laura Picas, Julien Viaud, Kristine Schauer, Stefano Vanni, Karim Hnia, Vincent Fraisier, Aurélien Roux, Patricia Bassereau, Frédérique Gaits-Iacovoni, Bernard Payrastre, Jocelyn Laporte, Jean-Baptiste Manneville, Bruno Goud (2014 Dec 9)

BIN1/​M-Amphiphysin2 induces clustering of phosphoinositides to recruit its downstream partner dynamin

Nature Communications5 : DOI : 10.1038/ncomms6647
Abdeslam Et Taouil, Emilie Brun, Patricia Duchambon, Yves Blouquit, Manon Gilles, Emmanuel Maisonhaute, Cécile Sicard-Roselli (2014 Oct 14)

How protein structure affects redox reactivity: example of Human centrin 2.

Physical chemistry chemical physics : PCCP : 16 : 24493-24498 : DOI : 10.1039/c4cp03536d

Année de publication : 2013

Xavier Lahaye, Takeshi Satoh, Matteo Gentili, Silvia Cerboni, Cécile Conrad, Ilse Hurbain, Ahmed El Marjou, Christine Lacabaratz, Jean-Daniel Lelièvre, Nicolas Manel (2013 Sep 6)

The capsids of HIV-1 and HIV-2 determine immune detection of the viral cDNA by the innate sensor cGAS in dendritic cells.

Immunity : 1132-42 : DOI : 10.1016/j.immuni.2013.11.002
Baligh Miladi, Cyrine Dridi, Ahmed El Marjou, Guilhem Boeuf, Hassib Bouallagui, Florence Dufour, Patrick Di Martino, Abdellatif Elm'selmi (2013 Jun 20)

An improved strategy for easy process monitoring and advanced purification of recombinant proteins.

Molecular biotechnology : 227-35 : DOI : 10.1007/s12033-013-9673-5
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